GLP-2R Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403966-ACT

GLP2R codifica o recetor do peptídeo semelhante ao glucagão-2 (GLP-2R), um GPCR de classe B expresso predominantemente em tecidos intestinais e entéricos, onde deteta a hormona incretina GLP-2. Após a ligação do ligando, o GLP-2R acopla-se principalmente à proteína Gs para elevar o cAMP e ativar programas transcricionais associados à PKA e ao CREB, que regulam o crescimento epitelial, a integridade da barreira, a absorção de nutrientes e a reparação da mucosa. A sinalização a jusante cruza-se com vias que controlam a sobrevivência e a proliferação celular, incluindo processos ligados a MAPK e PI3K, moldando a homeostase intestinal e a comunicação neuroendócrina. A desregulação da sinalização de GLP2R tem sido estudada em contextos de inflamação gastrointestinal, malabsorção e remodelação epitelial alterada, apoiando investigação mecanística sobre a função da barreira intestinal e a fisiologia metabólica.

GLP-2R O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GLP2R sem alterar a sequência de ADN subjacente.

GLP-2R O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GLP2R em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GLP2R, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de GLP-2R. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GLP2R nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de GLP-2R no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via GLP-2R em células tumorais com expressão de GLP2R silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.