Plasmide Double Nickase (h) GLP-1R: sc-400847-NIC

GLP1R code le récepteur du peptide-1 de type glucagon (GLP-1R), un récepteur couplé aux protéines G de classe B qui assure la transmission du signal des incrétines dans les îlots pancréatiques ainsi que dans de nombreux tissus extra-pancréatiques. Après liaison du ligand, le GLP-1R active principalement, via Gs, les voies cAMP/PKA et EPAC, avec un couplage supplémentaire à la mobilisation du calcium et à la signalisation MAPK/ERK, susceptibles de moduler la sécrétion, l’excitabilité et les programmes d’expression génique. Le trafic du récepteur, la désensibilisation et les processus dépendants de la β-arrestine régulent en outre la durée et l’organisation spatiale de la signalisation. Des altérations de l’expression ou de la signalisation de GLP1R sont largement étudiées dans le contexte des dérégulations métaboliques, notamment le diabète et l’obésité, et font également l’objet d’investigations quant à leur rôle dans la physiologie neuroendocrinienne et gastro-intestinale.

GLP-1R Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GLP1R dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GLP1R. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GLP1R. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GLP1R.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.