GIPR Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402895-ACT

O GIPR humano codifica o receptor do polipeptídeo insulinotrópico dependente de glicose, um GPCR de classe B expresso nas ilhotas pancreáticas e em outros tecidos metabolicamente ativos, que se acopla principalmente à proteína Gs para elevar o cAMP e ativar a transcrição dependente de PKA/CREB. A sinalização de GIPR modula a secreção de insulina estimulada pela glicose, a sobrevivência das células β e programas anabólicos induzidos por nutrientes, com crosstalk adicional com as vias PI3K/AKT e ERK/MAPK, que influenciam o crescimento celular e respostas ao estresse. Alterações na expressão ou na sinalização de GIPR têm sido implicadas em desregulação metabólica, incluindo fenótipos relacionados à obesidade e ao diabetes tipo 2, e também são usadas como marcador do estado de linhagem endócrina. Como resultado, o GIPR é amplamente estudado na biologia de receptores hormonais, na função das ilhotas e em redes gênicas reguladas por cAMP relevantes para mecanismos de doenças metabólicas.

GIPR O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GIPR sem alterar a sequência de ADN subjacente.

GIPR O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GIPR em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GIPR, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de GIPR. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GIPR nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de GIPR no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via GIPR em células tumorais com expressão de GIPR silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.