GILT Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404810-ACT
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- GILT Plasmide di attivazione CRISPR (h) è un mediatore sinergico di attivazione (SAM) del sistema di attivazione trascrizionale disegnato per upregolare specificatamente l'espressione genica
- GILT CRISPR Activation Plasmid (h) consiste di tre plasmidi in proporzione 1:1:1 : un plasmide che codifica la nucleasi (D10A and N863A) Cas9 (dCas9) deattivata fusa al dominio di transattivazione VP64, ed un gene di resistenza alla blasticina; un plasmide che codifica per la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, ed un gene di resistenza all'igromicina;un plasmide che codifica un RNA guida di 20 nt target specifico, e un gene di resistenza alla puromicina.
- Il complesso SAM legae una regione sito-specifica circa 200-250 nt a monte del sito di start trascrizionale e fornisce un robusto reclutamento di fattori trascrizionali per un'attivazione altamente efficiente del gene target
- I gRNA codificati dal GILT CRISPR Activation Plasmid (h) e dal GILT CRISPR Activation Plasmid (h2) prendono di mira regioni regolatorie distinte a monte del sito di inizio della trascrizione di IFI30. Uno o entrambi i modelli potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: GILT Antibody (G-11): sc-393507
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
GILT Plasmide di attivazione CRISPR (h) | sc-404810-ACT | 20 µg | $397.00 |
La proteina 30 inducibile dall’interferone gamma (IFI30), nota anche come reduttasi tiolica lisosomiale inducibile dall’interferone gamma (GILT), è un enzima lisosomiale che catalizza la riduzione dei legami disolfuro per facilitare il processamento degli antigeni internalizzati ai fini della presentazione da parte dell’MHC di classe II. Promuovendo la generazione di peptidi nel compartimento endo-lisosomiale, IFI30 sostiene l’attivazione dell’immunità adattativa e si integra con programmi di segnalazione innata guidati dagli interferoni. L’attività di IFI30 contribuisce alla proteostasi redox-dipendente durante la gestione degli antigeni e può influenzare la comunicazione tra cellule immunitarie all’interno di microambienti infiammatori. Il processamento antigenico deregolato e gli stati trascrizionali associati agli interferoni che coinvolgono IFI30 sono spesso studiati in contesti di infiammazione cronica, biologia delle infezioni e immunologia dei tumori.
GILT Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di IFI30 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.
GILT Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus IFI30 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.
Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione IFI30, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di GILT. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus IFI30 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da GILT nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via GILT nelle cellule tumorali con espressione di IFI30 silenziata o ridotta.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.