GHR CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-420549

概要

成長ホルモン受容体（GHR）はマウスのGhr遺伝子にコードされる単回膜貫通型のサイトカイン受容体であり、成長ホルモン（GH）シグナル伝達を介して体成長、代謝、ならびに内分泌恒常性の調節に関与する。リガンド結合により受容体が二量体化するとJAK2が活性化され、下流のSTAT5による転写プログラムが誘導される。さらに、増殖、栄養代謝、細胞生存に影響するPI3K–AKT経路やMAPK経路とのクロストークも生じる。GHR依存的シグナルは肝臓におけるIGF-1産生と全身のインスリン感受性を形成し、受容体活性を成長および代謝表現型と結び付ける。GH–GHR軸の機能異常は、内分泌および発生の文脈における成長障害、インスリン抵抗性、組織リモデリングに関する研究で重要である。

GHR CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるGhr遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Ghr内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Ghrのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、GHRタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、GHRシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Ghr欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• GHRの機能に不可欠なGhrエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Ghrゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• GHR CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびGHR CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Ghr遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  GHR HDRプラスミド（m）および GHR HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはGhrホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のGhr標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。