GFRαL CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-415831

概要

GFRAL（GDNFファミリー受容体α様）は、糖脂質ホスファチジルイノシトール（GPI）アンカー型の共受容体をコードしており、RET受容体チロシンキナーゼにリガンド特異性を付与します。とりわけ、ストレス性サイトカインであるGDF15に対する応答で重要です。GFRαL依存的なRETシグナル伝達は、下流のMAPK/ERKおよびPI3K/AKT経路を活性化し、代謝的・炎症性の刺激に対する細胞応答を調節します。これは、エネルギーバランスの神経内分泌的制御との関連で特に注目されています。発現は後脳の限られた神経細胞集団で高く、栄養感知や全身恒常性における役割を支持します。GDF15–GFRαL–RET軸の異常は、悪液質様表現型、代謝性疾患、がんに伴う全身性影響と関連づけられており、GFRALは疾患関連モデルにおける経路解析の標的として有用です。

GFRαL CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるGFRAL遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、GFRAL内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、GFRALのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、GFRαLタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、GFRαLシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、GFRAL欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• GFRαLの機能に不可欠なGFRALエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、GFRALゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• GFRαL CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびGFRαL CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、GFRAL遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  GFRαL HDRプラスミド（h）および GFRαL HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはGFRALホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のGFRAL標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。