GFAP Plasmide Double Nickase (h): sc-400130-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- GFAP Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il GFAP Double Nickase Plasmid (h) e il GFAP Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira GFAP. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: GFAP Antibody (2E1): sc-33673
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
GFAP Plasmide Double Nickase (h) | sc-400130-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GFAP Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400130-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
La proteina acida fibrillare gliale (GFAP) è una proteina dei filamenti intermedi che costituisce un componente strutturale principale del citoscheletro degli astrociti ed è ampiamente utilizzata come marcatore della differenziazione astrocitaria e della gliosi reattiva. Organizzando le reti di filamenti e interagendo con i regolatori del citoscheletro, la GFAP contribuisce alla morfologia degli astrociti, alla stabilità meccanica e alla risposta cellulare a lesioni e segnali infiammatori. La dinamica della GFAP si intreccia con processi quali il rimodellamento del citoscheletro, la migrazione cellulare e la segnalazione da stress, che modellano la formazione della cicatrice gliale e le interazioni neuroimmuni. Un’alterata espressione o aggregazione della GFAP è associata a disfunzione astrocitaria in contesti neurologici e neurodegenerativi, inclusa la malattia di Alexander e, più in generale, le risposte a lesioni del SNC.
GFAP Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GFAP nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GFAP. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GFAP. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GFAP interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.