Gelsolin Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401005

Descripción general

GSN codifica gelsolina, una proteína de unión a actina regulada por calcio que corta y tapa los filamentos de actina para controlar la remodelación del citoesqueleto y la mecánica celular. Al modular la dinámica de la polimerización de actina, la gelsolina contribuye a procesos como la motilidad celular, la adhesión, la endocitosis y la apoptosis, y se relaciona con vías de señalización que gobiernan las respuestas al estrés y el tráfico de membranas. La alteración de la expresión de GSN o de la actividad de la gelsolina se ha asociado con cambios en la remodelación tisular y en microambientes inflamatorios, y se estudia con frecuencia en el contexto de la invasión de células cancerosas, la neurodegeneración y la biología cardiovascular. Como regulador clave del recambio de filamentos de actina, la gelsolina ofrece un nodo accesible para analizar fenotipos dependientes de la actina en diversos modelos de células humanas.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Gelsolin (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen GSN en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del GSN junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de GSN tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Gelsolin.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en GSN para la investigación de la señalización de Gelsolin, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de GSN críticos para la función de Gelsolin
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de GSN para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Gelsolin CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Gelsolin CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus GSN. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Gelsolin (h) y el plásmido HDR Gelsolin (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología GSN para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana GSN definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.