GDF-5 Lentiviral Activation Particles (h): sc-403202-LAC

Der Wachstumsdifferenzierungsfaktor 5 (GDF5) codiert für GDF-5, einen sezernierten Liganden der TGF-β-Superfamilie, der vorwiegend über BMP-Rezeptoren vom Typ I/II signalisiert und dadurch SMAD1/5/8‑abhängige transkriptionelle Programme aktiviert. GDF-5 reguliert die mesenchymale Kondensation, die chondrogene Differenzierung sowie die Morphogenese von Gelenken und Sehnen/Bändern und beeinflusst dabei die Produktion extrazellulärer Matrix und die Skelettmusterbildung. In adulten Geweben trägt es zur Knorpelhomöostase und zu reparaturassoziierten zellulären Antworten bei und ist in ein BMP/TGF-β‑Signalweg‑Cross-Talk eingebunden, der entzündliche und fibrotische Signalgebung prägt. Genetische Variation oder eine dysregulierte Expression von GDF5 wurde mit veränderter Skelettentwicklung und einer erhöhten Anfälligkeit für degenerative Gelenkphänotypen in Verbindung gebracht, was GDF5 zu einem relevanten Ziel für mechanistische Studien in der muskuloskelettalen Biologie macht.

GDF-5 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente GDF5-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

GDF-5 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der GDF5-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen GDF-5-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen GDF5-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.