GD3 Synthase Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404015-ACT

ST8SIA1 codifica la GD3 sintasi, una sialiltransferasi residente nel Golgi che catalizza la conversione di GM3 nel disialoganglioside GD3, plasmando la composizione dei glicosfingolipidi nella membrana plasmatica. Modulando i microdomini di membrana dipendenti dai gangliosidi, la GD3 sintasi influenza la segnalazione dei recettori, le interazioni cellula–cellula e i processi di traffico vescicolare, che si integrano con le vie che controllano proliferazione, migrazione e risposte allo stress. Un’attività alterata di ST8SIA1 è stata collegata a cambiamenti nei pattern di glicosilazione osservati in oncologia e in neurobiologia, dove l’equilibrio dei gangliosidi può influenzare i programmi di differenziamento e il riconoscimento immunitario. Queste proprietà rendono ST8SIA1 un nodo utile per analizzare la regolazione, guidata dalla sialilazione, delle reti di segnalazione e dell’organizzazione di membrana.

GD3 Synthase Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ST8SIA1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

GD3 Synthase Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ST8SIA1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ST8SIA1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di GD3 Synthase. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ST8SIA1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da GD3 Synthase nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via GD3 Synthase nelle cellule tumorali con espressione di ST8SIA1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.