GCN2CRISPR激活质粒(m): sc-424196-ACT

小鼠 Eif2ak4 编码 GCN2，这是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，可通过结合未氨酰化 tRNA 感知氨基酸缺乏并启动整合性应激反应（integrated stress response, ISR）。GCN2 被激活后会磷酸化 eIF2α，从而降低全局翻译，同时促进选择性翻译程序，例如 ATF4 依赖的转录，进而将营养应激与适应性代谢和氧化还原调控联系起来。该通路在蛋白稳态受挑战时，还与 mTORC1 信号、自噬调控以及核糖体相关质量控制（ribosome-associated quality control）发生交叉。GCN2 信号失衡与炎症和代谢表型、神经退行性疾病相关的应激反应，以及肿瘤细胞对营养匮乏微环境的适应有关，因此常用于应激生物学机制研究。

GCN2 CRISPR激活质粒（m）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性Eif2ak4的表达。

GCN2 CRISPR激活质粒（m）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的Eif2ak4基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于Eif2ak4转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性GCN2表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的Eif2ak4位点，并能够研究内源性位点上依赖于GCN2的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在Eif2ak4表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟GCN2通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。