GCH-I CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-420509

概要

マウスGch1は、GTPからテトラヒドロビオプテリン（BH4）を生合成する経路における律速酵素であるGTPシクロヒドロラーゼI（GCH-I）をコードする。BH4は、カテコールアミンおよびセロトニン産生に関与する芳香族アミノ酸水酸化酵素群、ならびに一酸化窒素（NO）シグナル伝達を制御する一酸化窒素合成酵素（NOS）の双方に必須の、レドックス活性を有する補因子である。GCH-IはBH4の利用可能性を制御することにより、プテリジン代謝を神経伝達物質の恒常性、血管生物学、そして酸化ストレス感受性と結び付けている。GCH-I/BH4軸の活性変化は、神経学的および心血管系の機能障害モデルにおいて、モノアミン経路の制御異常やNO合成におけるカップリング不全（アンカップリング）と関連づけられている。

GCH-I CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるGch1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Gch1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Gch1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、GCH-Iタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、GCH-Iシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Gch1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• GCH-Iの機能に不可欠なGch1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Gch1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• GCH-I CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびGCH-I CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Gch1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  GCH-I HDRプラスミド（m）および GCH-I HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはGch1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のGch1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。