GBP1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401778-ACT

A GBP1 (proteína 1 de ligação à guanilato) humana é uma grande GTPase induzível por interferão que atua como efetor antimicrobiano e inflamatório a jusante da sinalização JAK–STAT. A GBP1 associa-se a membranas intracelulares e a compartimentos que contêm patógenos para regular a imunidade autónoma da célula, incluindo respostas associadas ao inflamassoma, restrição da replicação microbiana e modulação de processos do citoesqueleto e vesiculares. Por meio do seu papel em redes de genes estimulados por interferão, a GBP1 ajuda a moldar programas transcricionais da imunidade inata que influenciam a apresentação de antigénios e a sinalização impulsionada por citocinas. A expressão desregulada de GBP1 é frequentemente usada como marcador de atividade aumentada de interferão e tem sido associada à patobiologia inflamatória e a estados do microambiente tumoral-imunitário em diversos contextos de doença.

GBP1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GBP1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

GBP1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GBP1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GBP1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de GBP1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GBP1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de GBP1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via GBP1 em células tumorais com expressão de GBP1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.