Plásmido CRISPR de Activación (h) Gastrin: sc-403220-ACT

El gen humano **GAST** codifica la **gastrina**, una hormona peptídica producida principalmente por las células G gástricas que regula la secreción de ácido gástrico, el crecimiento de la mucosa y la motilidad gastrointestinal. La gastrina señaliza sobre todo a través del receptor de colecistoquinina B (**CCKBR**), activando vías intracelulares como **PLC/PKC**, **MAPK/ERK** y la señalización dependiente de calcio para modular la proliferación epitelial y los programas secretorios. La desregulación de la expresión de gastrina y las alteraciones en la señalización gastrina–CCKBR se han asociado con el remodelado de la mucosa gástrica ligado a la hipergastrinemia y con perturbaciones más amplias de la homeostasis endocrina digestiva. Como marcador y regulador de la función endocrina gástrica, **GAST** se estudia con frecuencia en modelos de fisiología gástrica, señalización asociada a inflamación y diferenciación epitelial.

Gastrin El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de GAST sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Gastrin El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus GAST en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional GAST, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Gastrin. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo GAST y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Gastrin en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Gastrin en células tumorales con expresión de GAST silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.