GAPDH 더블 틈내기효소 플라스미드 (h): sc-400002-NIC

GAPDH는 해당과정(glycolysis)에서 핵심 단계 하나를 촉매하는 보존된 세포질 효소인 글리세르알데하이드-3-인산 탈수소효소(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase)를 암호화합니다. 이 효소는 NAD+/NADH 순환을 통해 포도당 대사를 ATP 생성 및 산화환원 항상성(redox homeostasis)과 연결합니다. 대사 기능 외에도 GAPDH는 산화적 또는 니트로화 조건에서 세포 스트레스 반응에 관여하며, 아폽토시스 조절, RNA 결합, 핵 신호전달 등을 포함합니다. 에너지 대사의 중심 노드로서 GAPDH의 발현과 활성은 저산소증과 대사 재프로그래밍 동안 자주 조절되며, 이는 종양 생물학, 신경퇴행, 염증 상태와 관련된 과정입니다. 또한 GAPDH는 기본 발현이 높고 거의 모든 조직에서 발현되기 때문에 유전자 발현 및 프로테오믹스 워크플로에서 흔히 기준(reference) 표적으로 사용되며, GAPDH의 교란은 정규화 편향과 대사적 교란 요인(confounder)을 평가하는 데 도움이 될 수 있습니다.

GAPDH 더블 니카제 플라스미드(h)는 human 세포주 내 GAPDH 유전자좌의 고특이성 편집을 위해 설계된 쌍을 이루는 플라스미드로 구성됩니다. 각 플라스미드는 Cas9 D10A 니카아제와 GAPDH 내의 반대 DNA 가닥을 표적으로 하는 고유한 sgRNA를 발현합니다. 반대 DNA 가닥의 인접 부위로 유도될 때, 두 니카아제는 서로 어긋난 단일 가닥 절단 부위를 생성하며, 이는 함께 엇갈린 이중 가닥 절단을 유발하여 두 가이드의 조화된 표적 활성을 필요로 합니다. 이렇게 생성된 DNA 절단은 내인성 세포 복구 경로, 특히 비동형 말단 결합(NHEJ)을 통해 해결되며, 이는 GAPDH의 기능을 방해하는 삽입 또는 결실을 초래한다. 표적 부위에서 이중 sgRNA 결합을 요구함으로써, 이중 니킹 접근법은 편집 특이성을 향상시키고 표적 정밀도에 대한 추가적인 제어가 필요한 응용을 위한 보완적인 CRISPR 전략을 제공한다.

편집된 세포를 효율적으로 식별할 수 있도록, 한 플라스미드는 형광 시각화를 위한 GFP를 발현하며, 다른 플라스미드는 항생제 선별을 위한 푸로마이신 내성 유전자를 포함하고 있습니다. 이러한 기능들은 공동 형질 도입된 세포 집단의 효율적인 농축을 지원하며, GAPDH 기능이 손상된 클론의 검증을 단순화합니다.

연구용으로만 사용하세요. 진단 또는 치료용이 아닙니다.