gankyrin CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402164-ACT

PSMD10 は、アンキリンリピートを含むオンコプロテインである gankyrin をコードしており、26S プロテアソームの制御複合体と会合して、ユビキチン依存的なタンパク質分解（ターンオーバー）を調節します。RB1/E2F や p53 シグナル伝達などの主要な腫瘍抑制経路と相互作用することで、gankyrin は細胞周期の進行、チェックポイント制御、アポトーシスに影響を与えます。PSMD10 の異常発現は、さまざまながんの文脈において増殖制御の破綻やプロテオスタシスの変化と関連づけられており、転写制御およびタンパク質分解ネットワークを研究するための機構的ハブとしての有用性を支持しています。さらに gankyrin は、タンパク質の安定性や制御複合体のアセンブリに対する影響を介して、ストレス応答や炎症性シグナル伝達にも関与します。

gankyrin CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PSMD10の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

gankyrin CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PSMD10 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPSMD10転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性gankyrinの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPSMD10遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるgankyrin依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPSMD10発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるgankyrin経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。