Plasmide Double Nickase (h) GABP-α: sc-417668-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) GABP-α correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide GABP-α Double Nickase (h) et le plasmide GABP-α Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant GABPA. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: GABP-α Antibody (G-1): sc-28312
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) GABP-α | sc-417668-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) GABP-α | sc-417668-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GABPA code la protéine GA-binding protein alpha (GABP-α), un facteur de transcription de la famille ETS se liant à l’ADN, qui forme un hétérodimère avec des sous-unités GABPB afin de réguler l’activité des promoteurs et des enhancers. Elle intègre des signaux contrôlant la biogenèse mitochondriale et les programmes de phosphorylation oxydative, notamment les gènes de la chaîne respiratoire codés par le noyau, et contribue à la progression du cycle cellulaire ainsi qu’à la différenciation par la coordination de réseaux transcriptionnels. GABP-α participe également à la régulation, associée à la chromatine et aux promoteurs, de gènes impliqués dans les voies immunitaires et de réponse au stress. La dérégulation de la transcription dépendante de GABPA a été associée à des états métaboliques altérés et à des phénotypes prolifératifs observés dans de multiples contextes cellulaires pertinents pour les maladies, ce qui étaye son utilisation comme nœud mécanistique pour l’exploration des voies de signalisation.
GABP-α Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GABPA dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GABPA. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GABPA. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GABPA.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.