GABA_A Rδ Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401954-ACT

GABRD codifica a subunidade δ do recetor humano GABA_A, um canal de cloreto controlado por ligando que medeia a neurotransmissão inibitória tónica no sistema nervoso central. A incorporação da subunidade δ em complexos recetoriais extra-sinápticos confere elevada sensibilidade ao GABA ambiente e contribui para uma condução sustentada de cloreto que molda a excitabilidade neuronal e as oscilações de rede. Ao regular o tónus inibitório, a sinalização do recetor GABA_A δ interliga-se com a plasticidade sináptica, a modulação por neuroesteroides responsiva ao stress e o equilíbrio excitação–inibição. Alterações na expressão de GABRD ou na composição do recetor têm sido associadas, em estudos de investigação, a fenótipos neuropsiquiátricos e neurológicos envolvendo perturbações da sinalização inibitória, incluindo suscetibilidade a convulsões e endofenótipos relacionados com o humor.

GABAA Rδ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GABRD sem alterar a sequência de ADN subjacente.

GABAA Rδ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GABRD em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GABRD, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de GABAA Rδ. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GABRD nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de GABAA Rδ no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via GABAA Rδ em células tumorais com expressão de GABRD silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.