G3BP1 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-400745-LAC

G3BP1 (proteína 1 de ligação à proteína Ras GTPase ativadora) é uma proteína de ligação a RNA que atua como um nucleador central de grânulos de estresse citoplasmáticos, coordenando a triagem de mRNAs, a repressão da tradução e a estabilidade de RNAs durante o estresse celular. Por meio de seus domínios RRM e RGG, a G3BP1 integra sinalização e metabolismo de RNA ao engajar vias ligadas a respostas imunes inatas antivirais, à sinalização MAPK/ERK e à remodelação de RNPs. Ela também se conecta a programas de dano ao DNA e de estresse de replicação via regulação do destino de transcritos e de redes de interações proteína–proteína que moldam decisões de sobrevivência celular. A atividade desregulada de G3BP1 tem sido associada a uma dinâmica anômala de grânulos de estresse e a circuitos alterados de regulação de RNA observados em oncologia, neurodegeneração e interações vírus–hospedeiro, tornando-a um nó útil para estudos mecanísticos de fenótipos adaptativos ao estresse.

As Partículas de Ativação Lentivirais G3BP1 (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de G3BP1 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais G3BP1 (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição G3BP1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de G3BP1. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo G3BP1 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.