G3BP1 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400745-LAC

G3BP1 (Ras GTPase-activating protein-binding protein 1) è una proteina legante l’RNA che funge da nucleatore centrale dei granuli di stress citoplasmatici, coordinando lo smistamento degli mRNA, la repressione della traduzione e la stabilità dell’RNA durante lo stress cellulare. Attraverso i suoi domini RRM e RGG, G3BP1 integra la segnalazione e il metabolismo dell’RNA interagendo con vie collegate alle risposte immunitarie innate antivirali, alla segnalazione MAPK/ERK e al rimodellamento degli RNP. Interagisce inoltre con i programmi di danno al DNA e di stress replicativo tramite la regolazione del destino dei trascritti e di reti di interazioni proteina-proteina che orientano le decisioni di sopravvivenza cellulare. Un’attività deregolata di G3BP1 è stata associata a dinamiche anomale dei granuli di stress e ad alterazioni dei circuiti di regolazione dell’RNA osservate in oncologia, nelle malattie neurodegenerative e nelle interazioni virus–ospite, rendendola un nodo utile per studi meccanicistici dei fenotipi di adattamento allo stress.

Le particelle di attivazione lentivirale G3BP1 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di G3BP1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale G3BP1 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione G3BP1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di G3BP1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo G3BP1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.