FUT2 Plasmide di attivazione CRISPR (h2): sc-409559-ACT-2

Il gene umano FUT2 codifica la α(1,2)-fucosiltransferasi 2 (FUT2), una glicosiltransferasi residente nell’apparato di Golgi che catalizza la fucosilazione terminale dei glicani per generare l’antigene H di tipo 1 e epitopi fucosilati correlati sulle superfici mucosali e sulle glicoproteine secrete. Regolando lo stato di secretore, FUT2 modula processi dipendenti dai glicani, tra cui la presentazione degli antigeni ABO nelle secrezioni, la biologia della barriera epiteliale e le interazioni ospite–microbo che plasmano l’immunità mucosale e la composizione del microbioma. La variabilità genetica o la perdita dell’attività di FUT2 è associata a una suscettibilità modificata alle infezioni e a fenotipi infiammatori, ed è stata collegata a caratteristiche quali il rischio di malattia infiammatoria intestinale, la suscettibilità al norovirus e cambiamenti nella struttura delle comunità microbiche. L’editing del gene FUT2 e la perturbazione funzionale sono impiegati per analizzare le vie di glicosilazione, mappare i determinanti di legame di lectine e patogeni e modellare come la fucosilazione mucosale influenzi la segnalazione immunitaria e la fisiologia epiteliale in sistemi cellulari umani.

FUT2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h2) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di FUT2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

FUT2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h2) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus FUT2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione FUT2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di FUT2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus FUT2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da FUT2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via FUT2 nelle cellule tumorali con espressione di FUT2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.