Fucokinase Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-409449

Descripción general

El gen humano **FUK** codifica la **fucocinasa**, una quinasa citosólica que fosforila la **L-fucosa** a **fucosa-1-fosfato** en la vía de rescate de la fucosa, aportando sustrato para la biosíntesis de **GDP-fucosa**. Al contribuir a los reservorios celulares de fucosa activada, **FUK** favorece la **fucosilación** de glicoproteínas y glicolípidos, una modificación que modula la señalización de receptores, la adhesión célula–célula y el reconocimiento inmunitario. Las alteraciones del metabolismo de la fucosa y de los patrones de fucosilación se han asociado con inflamación desregulada, señalización oncogénica y cambios en la capacidad invasiva de las células tumorales, lo que convierte a **FUK** en un nodo relevante para el estudio de fenotipos dependientes de glicanos. El análisis funcional de **FUK** ayuda a vincular el flujo metabólico a través de las vías de azúcares nucleotídicos con la actividad de las glicosiltransferasas y los cambios resultantes en los glicoproteomas de membrana y secretados.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Fucokinase (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen FUK en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del FUK junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de FUK tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Fucokinase.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en FUK para la investigación de la señalización de Fucokinase, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de FUK críticos para la función de Fucokinase
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de FUK para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Fucokinase CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Fucokinase CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus FUK. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Fucokinase (h) y el plásmido HDR Fucokinase (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología FUK para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana FUK definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.