FRRS1L CRISPR Activation Plasmid (h): sc-407611-ACT

FRRS1L (ferric chelate reductase 1 like) kodiert ein mit dem endoplasmatischen Retikulum assoziiertes neuronales Protein, das an der Reifung und funktionellen Regulation von AMPA‑Typ‑Glutamatrezeptoren beteiligt ist. Durch die Unterstützung von Rezeptorassemblierung/-transport und synaptischer Lokalisation trägt FRRS1L zur exzitatorischen Neurotransmission, zur synaptischen Plastizität und zu aktivitätsabhängigen Signalnetzwerken im zentralen Nervensystem bei. Eine Störung der FRRS1L‑Funktion wurde mit neuroentwicklungsbedingten und epileptischen Phänotypen in Verbindung gebracht, was mit einer beeinträchtigten glutamatergen Signalübertragung und einer veränderten Erregbarkeit neuronaler Netzwerke vereinbar ist. Diese Eigenschaften machen FRRS1L zu einem nützlichen Ziel für die Untersuchung der Synapsenbiologie, der Proteostase von Rezeptoren und von Signalwegen, die die neuronale Entwicklung und die Funktion neuronaler Schaltkreise steuern.

FRRS1L Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen FRRS1L-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

FRRS1L Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des FRRS1L-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der FRRS1L-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen FRRS1L-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native FRRS1L-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von FRRS1L-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des FRRS1L-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem FRRS1L-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.