Plasmide CRISPR/Cas9 KO FRP-4 (m): sc-422899

Présentation

Sfrp4 code la protéine sécrétée « secreted frizzled-related protein 4 » (FRP-4), un modulateur soluble de la signalisation Wnt qui se lie aux ligands Wnt et/ou aux récepteurs Frizzled afin d’ajuster l’activité des voies dépendantes de la β-caténine et des voies non canoniques. Dans les tissus murins, FRP-4 contribue à la régulation des décisions de destinée cellulaire, de la prolifération, du remodelage de la matrice extracellulaire et des programmes de différenciation importants pour la mise en place des patrons développementaux et l’homéostasie tissulaire. Une expression altérée de Sfrp4 a été associée à une dérégulation de l’activité de la voie Wnt dans des contextes tels que la fibrose, le remodelage métabolique des tissus et la biologie tumorale, où des modifications du « tonus » Wnt peuvent influencer les interactions épithélio-mésenchymateuses et les réponses stromales. En tant que régulateur de voie sécrété, Sfrp4 est fréquemment étudié au sein de réseaux de dialogue (« cross-talk ») de signalisation intégrant Wnt avec TGF-β, des signaux inflammatoires et des programmes transcriptionnels de spécification de lignée.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO FRP-4 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Sfrp4 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Sfrp4, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Sfrp4 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine FRP-4.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Sfrp4 pour l'étude de la signalisation de FRP-4, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Sfrp4 essentiels à la fonction de FRP-4
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Sfrp4 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le FRP-4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le FRP-4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Sfrp4. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le FRP-4 plasmide HDR (m) et le FRP-4 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Sfrp4 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Sfrp4 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.