FOXJ1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402226-ACT

Das humane FOXJ1-Gen codiert einen Forkhead-Box-Transkriptionsfaktor, der als Masterregulator der Bildung motiler Zilien (motile Ciliogenese) fungiert und das Andocken der Basalkörper, den Aufbau des Axonems sowie das für die Differenzierung multiziliierter Zellen erforderliche Transkriptionsprogramm koordiniert. Die FOXJ1-Aktivität ist mit entwicklungsbiologischen Signalwegen und epithelialen Differenzierungswegen verknüpft, einschließlich zilienassoziierter Transkriptionsnetzwerke, die die Identität von Atemwegs- und Ependymzellen prägen. Eine fehlregulierte FOXJ1-Expression oder Störungen in zilienbezogenen Genprogrammen stehen mit beeinträchtigter mukoziliärer Clearance und weiteren ciliopathieassoziierten Phänotypen in Verbindung, was FOXJ1 für Studien zum respiratorischen Epithel, zur Funktion des Reproduktionstrakts und zur Homöostase des Liquor cerebrospinalis relevant macht. Als nukleares, DNA-bindendes Protein stellt FOXJ1 einen gut zugänglichen Ansatzpunkt dar, um zu untersuchen, wie die transkriptionelle Kontrolle von Ziliengenen Barrierefunktion, Flüssigkeitsströmung und angeborene Abwehrmechanismen beeinflusst.

FOXJ1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen FOXJ1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

FOXJ1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des FOXJ1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der FOXJ1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen FOXJ1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native FOXJ1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von FOXJ1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des FOXJ1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem FOXJ1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.