FOXJ1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402226-ACT

ヒトFOXJ1は、運動性繊毛の形成（モータイル・シリオジェネシス）を統括するマスター制御因子として機能するフォークヘッドボックス型転写因子をコードしており、基底小体のドッキング、軸糸（アクソネーム）の組み立て、多繊毛細胞の分化に必要な転写プログラムを協調的に制御します。FOXJ1の活性は、発生シグナルや上皮分化経路と連動し、気道上皮細胞や上衣細胞のアイデンティティを形作る、繊毛関連の転写ネットワークにも関与します。FOXJ1の発現や繊毛遺伝子プログラムの異常は、粘液線毛クリアランスの低下や、より広範な繊毛病（ciliopathy）関連の表現型と関連しており、呼吸器上皮、生殖器官の機能、脳脊髄液の恒常性に関する研究で重要な分子です。核内のDNA結合タンパク質として、FOXJ1は、繊毛遺伝子の転写制御がバリア機能、液体の流れ、自然免疫防御機構にどのように影響するかを解析するうえで扱いやすい標的（ノード）となります。

FOXJ1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性FOXJ1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

FOXJ1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における FOXJ1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はFOXJ1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性FOXJ1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のFOXJ1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるFOXJ1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびFOXJ1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるFOXJ1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。