FOXC1 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-421637-ACT

Foxc1 codifica il fattore di trascrizione della famiglia forkhead box FOXC1, un regolatore del legame al DNA specifico per sequenza che controlla la strutturazione dello sviluppo, le decisioni di destino cellulare e i programmi di differenziamento. Nei sistemi murini, FOXC1 integra segnali in reti trascrizionali coinvolte nelle interazioni mesenchima–epitelio, nel rimodellamento della matrice extracellulare e in vie guidate da morfogeni come TGF-β/BMP e WNT, contribuendo a modellare l’organogenesi e l’omeostasi tissutale. Un dosaggio alterato o un’attività regolatoria anomala di FOXC1 è collegata a fenotipi congeniti del segmento anteriore e craniofacciali ed è stata associata, nella biologia del cancro, a una deregolazione dell’identità cellulare e a firme di espressione genica invasive. Queste caratteristiche rendono FOXC1 un nodo utile per analizzare i circuiti di regolazione genica che governano lo sviluppo, gli stati “stem-like” e le risposte al microambiente.

FOXC1 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Foxc1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

FOXC1 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Foxc1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Foxc1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di FOXC1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Foxc1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da FOXC1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via FOXC1 nelle cellule tumorali con espressione di Foxc1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.