FOG-2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401361-ACT

ZFPM2 codifica il “friend of GATA-2” (FOG-2), un coregolatore trascrizionale multi–zinc finger che si lega ai fattori della famiglia GATA per plasmare programmi di espressione genica specifici di linea cellulare. Nelle cellule umane, FOG-2 modula l’attivazione e la repressione trascrizionale coordinandosi con complessi di rimodellamento della cromatina e complessi corepressori, influenzando vie di sviluppo e differenziamento. Questo asse regolatorio è implicato nell’organogenesi e nella specificazione del destino cellulare; un’alterata attività di ZFPM2/FOG-2 è associata a reti trascrizionali deregolate in contesti patologicamente rilevanti, come i difetti cardiaci congeniti e la biologia tumorale. In quanto cofattore nodale nei circuiti guidati da GATA, FOG-2 è spesso studiato per comprendere come le partnership tra fattori di trascrizione modulino lo stato epigenetico e gli output di segnalazione a valle.

FOG-2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ZFPM2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

FOG-2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ZFPM2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ZFPM2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di FOG-2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ZFPM2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da FOG-2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via FOG-2 nelle cellule tumorali con espressione di ZFPM2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.