FKBP2 Plasmide Double Nickase (h): sc-409613-NIC

FKBP2 codifica la FK506-binding protein 2, un’isomerasi peptidil-prolil cis–trans residente nel reticolo endoplasmatico (RE) che funge da chaperone molecolare, supportando il ripiegamento e il controllo qualità delle proteine secretorie e di membrana. In quanto membro della famiglia delle immunofiline, FKBP2 contribuisce alla proteostasi del RE e si integra con la segnalazione della risposta alle proteine non ripiegate (UPR) e con le vie di degradazione associate al RE (ERAD) durante lo stress cellulare. L’alterazione della capacità chaperonica del RE e delle dinamiche di ripiegamento regolate dalle immunofiline è rilevante per i meccanismi implicati nei disturbi da misfolding proteico e nei fenotipi di adattamento allo stress nelle cellule umane. FKBP2 è quindi spesso studiato nel contesto della regolazione della via secretoria, dell’omeostasi del RE legata al redox e al calcio, e della modulazione della maturazione proteica.

FKBP2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus FKBP2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di FKBP2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di FKBP2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con FKBP2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.