Filamin 1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-431396-ACT

O gene Flna de camundongo codifica a filamina 1, uma proteína de alto peso molecular que se liga à actina e atua como plataforma de ancoragem (scaffold), fazendo a ligação cruzada da F-actina e conectando o citoesqueleto a receptores transmembrana para regular a forma celular, a adesão e a mecanossensibilidade. A filamina 1 organiza hubs de sinalização para a adesão dependente de integrinas, a renovação das adesões focais e a remodelação do citoesqueleto dirigida por GTPases da família Rho, influenciando a migração e a morfogênese tecidual. Por meio de interações com proteínas de membrana e de sinalização, ela modula processos como endocitose, estabilidade da membrana e programas transcricionais responsivos à força. A desregulação da função de FLNA tem sido associada a fenótipos do desenvolvimento e neurovasculares e é amplamente estudada por seus papéis na motilidade celular, na integridade de barreiras e em redes de sinalização do citoesqueleto.

Filamin 1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Flna sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Filamin 1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Flna em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Flna, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Filamin 1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Flna nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Filamin 1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Filamin 1 em células tumorais com expressão de Flna silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.