Fibromodulin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401610

Übersicht

FMOD kodiert Fibromodulin, ein kleines leucinreiches Proteoglykan der extrazellulären Matrix, das an Kollagenfibrillen bindet und zur Regulation der Fibrillogenese, der Matrixarchitektur sowie der mechanischen Gewebeeigenschaften beiträgt. Fibromodulin moduliert die Signalübertragung von Wachstumsfaktoren, einschließlich Interaktionen mit Signalwegen der TGF-β-Familie, und unterstützt die Zell–Matrix-Kommunikation, die Adhäsion, Migration und Programme der Wundheilung beeinflusst. Eine veränderte FMOD-Expression oder ECM-Organisation wurde in mehreren Geweben mit fibrotischem Umbau und dysregulierten stromalen Antworten in Verbindung gebracht. Als Matrixbestandteil, der die Kollageneinlagerung und die Verfügbarkeit von Signalen beeinflusst, wird FMOD häufig in der Bindegewebsbiologie, bei entzündungsassoziiertem Remodeling und in der Forschung zum Tumormikromilieu untersucht.

Das Fibromodulin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des FMOD-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des FMOD-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von FMOD nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Fibromodulin-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von FMOD-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Fibromodulin-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf FMOD-Exone abzielen, die für die Fibromodulin-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere FMOD-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Fibromodulin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Fibromodulin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des FMOD-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Fibromodulin HDR-Plasmid (h) und Fibromodulin HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von FMOD-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten FMOD-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.