Fibrinogen α CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-400793

Übersicht

FGA kodiert die Fibrinogen-α-Kette, ein in der Leber gebildetes und sezerniertes Glykoprotein, das sich mit den β- und γ-Ketten zu Fibrinogen zusammensetzt, der löslichen Vorstufe von Fibrin. Bei einer Gefäßverletzung löst die durch Thrombin vermittelte Spaltung von Fibrinogen Polymerisations- und Quervernetzungsprozesse aus, die Gerinnsel stabilisieren und im Rahmen der Gerinnungskaskade die Thrombozytenadhäsion unterstützen. Fibrin(ogen) ist zudem an der Umgestaltung der extrazellulären Matrix und an entzündlichen Signalwegen beteiligt, indem es mit Integrinen und anderen Rezeptoren interagiert, und verknüpft so die Hämostase mit der Wundheilung. Eine veränderte Funktion oder Expression von FGA ist mit quantitativen oder qualitativen Fibrinogen-Anomalien assoziiert, die die Gerinnselbildung beeinflussen und thrombotische oder Blutungsphänotypen verändern können, was FGA für Studien zur Gerinnungsbiologie und vaskulären Entzündung relevant macht.

Das Fibrinogen α CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des FGA-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des FGA-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von FGA nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Fibrinogen α-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von FGA-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Fibrinogen α-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf FGA-Exone abzielen, die für die Fibrinogen α-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere FGA-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Fibrinogen α CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Fibrinogen α CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des FGA-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Fibrinogen α HDR-Plasmid (h) und Fibrinogen α HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von FGA-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten FGA-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.