Fibrinogen α Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400793-ACT

FGA codifica a cadeia alfa do fibrinogênio, um componente central do hexâmero de fibrinogênio plasmático que é convertido proteoliticamente pela trombina em fibrina durante a coagulação. Além da formação do coágulo, a fibrina(o)gênio interage com a agregação plaquetária, a adesão mediada por integrinas e o remodelamento da matriz extracelular, conectando a hemostasia à inflamação e ao reparo tecidual. A regulação da expressão de FGA em hepatócitos e em contextos de fase aguda influencia os níveis circulantes de fibrinogênio e a sinalização subsequente nas vias de trombina/PAR e de fibrinólise. A produção ou o processamento desregulados de fibrinogênio estão associados a distúrbios hereditários do fibrinogênio e contribuem para fenótipos de doenças trombóticas e inflamatórias relevantes para pesquisas em biologia cardiovascular e hepática.

Fibrinogen α O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FGA sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Fibrinogen α O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FGA em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FGA, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Fibrinogen α. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FGA nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Fibrinogen α no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Fibrinogen α em células tumorais com expressão de FGA silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.