Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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FHL-2 Double Nickase Plasmid (h): sc-402930-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das FHL-2 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- FHL-2 Double-Nickase-Plasmid (h) und FHL-2 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf FHL2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: FHL-2: sc-393514
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
FHL-2 Double Nickase Plasmid (h) | sc-402930-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
FHL-2 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402930-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
FHL2 kodiert das Protein „Four-and-a-half LIM domains protein 2“ (FHL-2), ein ausschließlich aus LIM-Domänen bestehendes Adapterprotein, das in fokalen Adhäsionen und im Zellkern lokalisiert und Protein-Protein-Interaktionen koordiniert, die die Dynamik des Zytoskeletts mit der transkriptionellen Kontrolle verknüpfen. FHL-2 moduliert Integrin/FAK-Signalwege, das Rho-GTPase-abhängige Aktin-Remodeling sowie Mechanotransduktionsprogramme und kann über Interaktionen mit Faktoren wie β-Catenin/TCF und weiteren kontextspezifischen Regulatoren transkriptionelle Outputs beeinflussen. Über diese Funktionen ist FHL2 mit zellulären Prozessen wie Adhäsion, Migration, Proliferation und Differenzierung verbunden. Eine dysregulierte Expression oder Aktivität von FHL2 wurde mit veränderter Gewebeumbau-Dynamik und onkogenen Signalzuständen in Zusammenhang gebracht, was seine Relevanz für Studien zu Fibrose, kardiovaskulärer Biologie und dem Verhalten von Krebszellen unterstreicht.
FHL-2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des FHL2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von FHL2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die FHL2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit FHL2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.