Plasmide CRISPR/Cas9 KO FGFR-4 (m): sc-420344

Présentation

Fgfr4 code le récepteur 4 du facteur de croissance des fibroblastes (FGFR-4), une tyrosine kinase réceptrice qui se lie aux ligands FGF et au sulfate d’héparane pour initier une signalisation via les voies MAPK/ERK, PI3K–AKT, PLCγ/PKC et STAT. Dans les cellules de souris, FGFR-4 régule la prolifération, la différenciation et la survie, et joue également des rôles dans le développement tissulaire et l’homéostasie métabolique. Une signalisation FGFR-4 altérée a été associée à des réponses dérégulées aux facteurs de croissance, à des modifications des programmes de migration et d’invasion cellulaires, ainsi qu’au remodelage du microenvironnement tumoral dans plusieurs contextes de modèles de cancer. Parce que FGFR-4 intègre des signaux extracellulaires à des sorties transcriptionnelles et cytosquelettiques, il est fréquemment étudié dans les réseaux de signalisation des récepteurs, la régulation par rétroaction et les interactions entre voies (crosstalk) avec d’autres RTK.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO FGFR-4 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Fgfr4 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Fgfr4, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Fgfr4 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine FGFR-4.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Fgfr4 pour l'étude de la signalisation de FGFR-4, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Fgfr4 essentiels à la fonction de FGFR-4
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Fgfr4 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le FGFR-4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le FGFR-4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Fgfr4. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le FGFR-4 plasmide HDR (m) et le FGFR-4 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Fgfr4 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Fgfr4 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.