FEN-1 Plasmide Double Nickase (h): sc-403168-NIC

La FEN1 umana codifica la flap endonuclease 1 (FEN-1), una nucleasi specifica per la struttura che taglia gli intermedi “a flap” 5′ generati durante la maturazione dei frammenti di Okazaki e la riparazione per escissione di basi a tratto lungo. FEN-1 agisce in coordinamento con PCNA, le DNA polimerasi e la ligasi I per mantenere l’integrità della forcella di replicazione e la stabilità del genoma, e contribuisce anche all’elaborazione di strutture secondarie del DNA che insorgono in condizioni di stress replicativo. L’alterazione della funzione di FEN1 è associata a un aumento della segnalazione di danno al DNA, della mutagenesi e dell’instabilità cromosomica, processi frequentemente studiati nella biologia dei tumori e nei disordini ereditari della manutenzione del genoma. Di conseguenza, FEN-1 è ampiamente utilizzata come nodo modello per studiare la scelta delle vie di riparazione del DNA, la riparazione associata alla replicazione e le risposte ad agenti genotossici.

FEN-1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus FEN1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di FEN1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di FEN1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con FEN1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.