FAST-1/2 CRISPR/Cas9 케이오 플라스미드 (m): sc-420290

개요

Foxh1(FAST-1/2)는 포크헤드 박스(forkhead box) 전사인자로, 마우스 발생 과정에서 Activin/Nodal–TGF-β 신호전달의 핵심 핵 내 효과기(nuclear effector)로 기능한다. SMAD2/3–SMAD4 복합체와 결합하여 중배엽·내배엽(mesendoderm) 유도, 좌우 축(left–right axis) 지정, 초기 패터닝 결정 등을 조절하는 전사 프로그램을 제어한다. Foxh1 의존적 유전자 네트워크는 상피–간엽 전이(EMT)와 계통(lineage) 결정에 관여하는 경로들과도 교차하므로, 신호 의존적 전사 조절을 분석하는 데 널리 활용되는 핵심 노드로 여겨진다. 이 축의 교란은 발생 이상과 관련될 뿐 아니라, 질환 연관 맥락에서 TGF-β에 의해 유도되는 전사 재프로그래밍의 기전을 연구하는 데에도 중요하다.

FAST-1/2 CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (m)는 mouse 세포주에서 Foxh1 유전자의 표적 파괴를 위해 설계된 플라스미드 풀입니다. 각 플라스미드는 Foxh1 유전자 내의 서로 다른 부위를 표적으로 하는 고유한 단일 가이드 RNA(sgRNA)와 Streptococcus pyogenes Cas9 뉴클레아제를 함께 발현합니다. 또한 이 플라스미드들은 GFP를 암호화하여, 형광 현미경이나 유세포 분석기를 통해 성공적으로 형질전환된 세포를 형광으로 식별하고 농축할 수 있게 합니다.

다중 가이드 설계는 Cas9에 의한 이중 가닥 절단 형성 후 Foxh1의 개방 독서 틀(ORF)을 파괴하는 삽입 또는 결실(indel)이 발생할 가능성을 높입니다. CRISPR/Cas9 시스템에 의해 유발된 DNA 절단은 내인성 비동종 말단 결합(NHEJ) 경로를 통해 복구되며, 이는 종종 FAST-1/2 단백질 발현을 소멸시키는 프레임 시프트 돌연변이를 초래합니다.

이 CRISPR 녹아웃 시스템은 FAST-1/2 신호 전달 연구, 기능 유전체학 연구, 암 생물학 연구 및 인간 세포주에서의 치료 반응 평가를 위한 Foxh1 결핍 세포 모델을 효율적으로 생성할 수 있게 합니다.

주요 특징

• FAST-1/2 기능에 중요한 Foxh1 엑손을 표적하는 sgRNA
  전달을 단순화하기 위해 단일 플라스미드에서 SpCas9 및 sgRNA의 공동 발현
  형질전환된 세포 식별을 위한 GFP 리포터
  녹아웃 효율 향상을 위해 여러 Foxh1 게놈 부위를 표적하는 플라스미드 풀
  형질전환을 통한 전달과 호환

설계 변형

CRISPRs +/- HDR

• FAST-1/2 CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (m) 및 FAST-1/2 CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (m2)에 의해 암호화되는 gRNA는 Foxh1 유전자좌 내의 서로 다른 부위를 표적화합니다. 표적화 설계 중 하나 또는 둘 다 이용 가능할 수 있습니다. 구입 가능 여부는 관련 제품을 참조하십시오.
  FAST-1/2 HDR 플라스미드 (m) 및 FAST-1/2 HDR 플라스미드 (m2)에 의해 암호화되는
  HDR 기증자 컨스트럭트는 푸로마이신 내성 카세트와 RFP 리포터를 포함하며, 이는 CRISPR/Cas9 KO 설계에 해당하는 정의된 Foxh1 표적 부위에서의 상동성 유도 복구를 지원하기 위해 Foxh1 상동성 암으로 둘러싸여 있습니다. HDR 기증자의 재고 여부는 달라질 수 있습니다. 재고 여부는 관련 제품을 참조하십시오.

연구용으로만 사용하세요. 진단 또는 치료용이 아닙니다.