Plásmido CRISPR de Activación (h) FAM198B: sc-409269-ACT

FAM198B (familia con similitud de secuencia 198, miembro B) codifica una proteína humana poco caracterizada, con vínculos emergentes con procesos asociados a la membrana y con la señalización intracelular que influyen en el estado celular y la organización tisular. Estudios transcriptómicos han descrito una regulación dependiente del contexto de FAM198B en múltiples tipos celulares, lo que sugiere posibles funciones en vías que gobiernan la diferenciación, la adhesión y programas transcripcionales sensibles al estrés. Se han observado alteraciones en la expresión de FAM198B en conjuntos de datos asociados a enfermedades, lo que respalda su utilidad como un nodo molecular para estudiar la regulación génica en la fisiopatología. Dado que las anotaciones mecanísticas siguen siendo limitadas, la modulación controlada de FAM198B endógeno ofrece un enfoque manejable para cartografiar redes génicas y fenotipos aguas abajo.

FAM198B El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de FAM198B sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

FAM198B El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus FAM198B en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional FAM198B, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de FAM198B. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo FAM198B y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de FAM198B en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía FAM198B en células tumorales con expresión de FAM198B silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.