Plásmido CRISPR de Activación (h) FAM150B: sc-409087-ACT

FAM150B (también conocido como ALKAL2) codifica un ligando secretado implicado en la activación de la familia ALK de receptores tirosina quinasa, lo que favorece la comunicación célula–célula y la regulación dependiente del contexto de programas de crecimiento y diferenciación. A través de la señalización de ALK, FAM150B puede converger con cascadas downstream canónicas como MAPK/ERK y PI3K/AKT, que influyen en la proliferación, la supervivencia y el patrón del desarrollo. La expresión de FAM150B se observa en tejidos neuronales y otros tejidos, y la señalización desregulada del eje ALK es relevante en contextos de investigación oncológica y del neurodesarrollo. Como modulador de la actividad de receptores tirosina quinasa, FAM150B constituye un nodo útil para estudiar el control extracelular de los umbrales de señalización, la dinámica de activación del receptor y las respuestas transcripcionales.

FAM150B El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de FAM150B sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

FAM150B El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus FAM150B en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional FAM150B, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de FAM150B. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo FAM150B y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de FAM150B en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía FAM150B en células tumorales con expresión de FAM150B silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.