FAM148C Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-414279

Descripción general

C2CD4C (FAM148C) codifica una proteína que contiene un dominio C2, implicada en la señalización asociada a membranas dependiente de calcio y en la regulación de las interacciones proteína–proteína en membranas intracelulares. Anotaciones funcionales emergentes vinculan FAM148C con vías que coordinan el tráfico vesicular, la dinámica del citoesqueleto y programas transcripcionales sensibles a estímulos que influyen en el crecimiento celular y la homeostasis metabólica. Estudios genéticos han asociado variación en el locus C2CD4C con rasgos glucémicos y con el riesgo de diabetes tipo 2, lo que respalda investigar sus funciones en la actividad de los islotes pancreáticos y en redes más amplias de señalización endocrina. Estas características hacen de FAM148C un objetivo útil para estudios mecanísticos de integración de señales y de las relaciones genotipo–fenotipo en modelos celulares humanos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO FAM148C (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen C2CD4C en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del C2CD4C junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de C2CD4C tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína FAM148C.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en C2CD4C para la investigación de la señalización de FAM148C, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de C2CD4C críticos para la función de FAM148C
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de C2CD4C para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido FAM148C CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido FAM148C CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus C2CD4C. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR FAM148C (h) y el plásmido HDR FAM148C (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología C2CD4C para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana C2CD4C definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.