Plásmido CRISPR de Activación (h) FAM13A: sc-405714-ACT

FAM13A (familia con similitud de secuencia 13, miembro A) codifica una proteína citoplasmática implicada en la regulación de la señalización de las GTPasas de la familia Rho y de la dinámica del citoesqueleto, con funciones descritas en la polaridad, migración y diferenciación de células epiteliales. Estudios genéticos y funcionales vinculan FAM13A con vías que configuran la homeostasis de las vías aéreas y los alvéolos, incluidas la adhesión celular y los procesos de remodelación que influyen en la función de barrera. Las variaciones en FAM13A se han asociado con rasgos de función pulmonar y con la susceptibilidad a enfermedades respiratorias crónicas, lo que respalda su uso como punto de entrada molecular para estudiar la biología de las vías aéreas. En contextos relacionados con cáncer y fibrosis, se ha evaluado cómo la alteración de la expresión de FAM13A afecta programas de proliferación y motilidad, lo que la hace relevante para estudios mecanísticos del remodelado tisular.

FAM13A El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de FAM13A sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

FAM13A El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus FAM13A en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional FAM13A, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de FAM13A. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo FAM13A y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de FAM13A en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía FAM13A en células tumorales con expresión de FAM13A silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.