Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Factor H Double Nickase Plasmid (h): sc-401099-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Factor H Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Factor H Double-Nickase-Plasmid (h) und Factor H Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CFH abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Factor H: sc-47685
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Factor H Double Nickase Plasmid (h) | sc-401099-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Factor H Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401099-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Komplementfaktor H (CFH) kodiert den Faktor H, einen löslichen Regulator des alternativen Komplementwegs, der Wirtsoberflächen schützt, indem er den Zerfall der C3‑Konvertase beschleunigt und als Kofaktor für die durch Faktor I vermittelte Spaltung von C3b dient. Durch die Bindung an C3b, Polyanionen und Glykosaminoglykane auf körpereigenen Membranen begrenzt Faktor H die Komplementamplifikation, moduliert die Opsonisierung und dämpft nachgeschaltete inflammatorische Signalwege. Genetische Variation oder eine Fehlregulation von CFH ist mit komplementvermittelter Gewebeschädigung und aberranter Aktivierung der angeborenen Immunität assoziiert, mit besonderer Relevanz für Erkrankungen der Retina und der Niere sowie für systemische inflammatorische Phänotypen. Als zentrale Kontrollstelle der Komplementhomöostase wird CFH umfassend in Signalwegen untersucht, die die extrazelluläre Immunabwehr, die Integrität des Endothels und den Umgang mit Immunkomplexen steuern.
Factor H Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CFH-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CFH abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CFH-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CFH-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.