FAAH CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402470-ACT

ヒトFAAH（fatty acid amide hydrolase：脂肪酸アミド加水分解酵素）は膜結合型のセリン加水分解酵素であり、アナンダミドおよび関連するN-アシルエタノールアミン類を含む生理活性脂肪酸アミドのシグナルを終結させます。FAAHはエンドカンナビノイド・トーンを制御することで、脂質シグナル伝達経路を介して、シナプス伝達、神経炎症性シグナル、疼痛知覚、ならびに代謝恒常性を調節します。FAAH活性の変化は、カンナビノイド受容体シグナルの破綻と関連づけられており、神経精神疾患関連の表現型、物質使用の生物学、炎症過程、肥満関連代謝などの文脈で研究されています。したがってFAAHは、脂質メディエーターの代謝回転と、それに続く転写応答および細胞応答を検討するうえで重要な結節点となります。

FAAH CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性FAAHの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

FAAH CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における FAAH 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はFAAH転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性FAAHの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のFAAH遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるFAAH依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびFAAH発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるFAAH経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。