Exo70 Plasmídeo duplo de Nickase (m): sc-424708-NIC
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- Exo70O plasmídeo de dupla Nickase (m) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase Exo70 (m) e o Plasmídeo Double Nickase Exo70 (m2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para Exoc7. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:Exo70 Anticorpo (D-6): sc-365825
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
Exo70 Plasmídeo duplo de Nickase (m) | sc-424708-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Exo70 Plasmídeo duplo de Nickase (m2) | sc-424708-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Exoc7 codifica a Exo70, uma subunidade central do complexo exocisto octamérico, que ancora vesículas secretoras em sítios específicos da membrana plasmática para permitir a exocitose polarizada. Em células de camundongo, a Exo70 sustenta eventos de tráfego de membranas necessários para a polaridade epitelial, o crescimento de neuritos, a citocinese e a migração celular dirigida, ao coordenar o acoplamento/docking de vesículas com a remodelação do citoesqueleto de actina e vias de sinalização de pequenas GTPases. O tráfego dependente do exocisto influencia a reciclagem de receptores e a entrega à superfície de moléculas de adesão, vinculando a função da Exo70 a vias que regulam a forma celular, a invasão e a morfogênese tecidual. A desregulação de componentes do exocisto tem sido associada a motilidade celular aberrante e defeitos de desenvolvimento, tornando o Exoc7 um alvo útil para estudos mecanísticos de fenótipos impulsionados pelo tráfego.
Exo70 O Plasmídeo de Nickase Dupla (m) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus Exoc7 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de Exoc7. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função Exoc7. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com Exoc7 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.