Ets-2 Double Nickase Plasmid (h): sc-416381-NIC

ETS2 kodiert Ets-2, ein Mitglied der ETS-Familie sequenzspezifischer Transkriptionsfaktoren, das an GGAA/T‑Motive bindet und dadurch Genexpressionsprogramme reguliert, die Zellzyklusprogression, Differenzierung und Überleben steuern. Die Aktivität von Ets-2 wird durch MAPK/ERK‑abhängige Phosphorylierung moduliert und integriert Signale nachgeschaltet von Wachstumsfaktor- und Zytokinwegen, um transkriptionelle Antworten in unterschiedlichen Zelltypen zu formen. Durch die Regulation von Genen, die an der Umgestaltung der extrazellulären Matrix, inflammatorischer Signalgebung und Proliferation beteiligt sind, wird ETS2 mit kontextabhängigen onkogenen und tumorunterdrückenden Netzwerken sowie mit Immun- und Entwicklungsphänotypen in Verbindung gebracht. Eine veränderte ETS2‑Gen-Dosierung oder Aktivierung entsprechender Signalwege wurde mit Malignomen und mit Biologie im Zusammenhang mit Chromosom 21 assoziiert, was ETS2 zu einem nützlichen Knotenpunkt für mechanistische Studien zur Transkriptionsregulation und zum Signalweg‑Crosstalk macht.

Ets-2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ETS2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ETS2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ETS2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ETS2-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.