Estrogen Receptor beta Plasmide Double Nickase (m): sc-420232-NIC

Il gene murino *Esr2* codifica il recettore degli estrogeni beta (ERβ), un recettore nucleare attivato da ligando che funge da fattore di trascrizione regolando geni coinvolti nella biologia riproduttiva, nella segnalazione neurale, nella modulazione immunitaria e nell’omeostasi tissutale. Dopo il legame con l’estrogeno, ERβ interagisce con gli estrogen response elements e con complessi di coregolatori per modulare lo stato della cromatina e la trascrizione all’interno delle reti di segnalazione degli ormoni steroidei, con un ampio crosstalk con le vie MAPK/ERK e PI3K/AKT. L’attività di ERβ influenza, in modo dipendente dal contesto, il controllo del ciclo cellulare, i programmi di differenziamento, la funzione mitocondriale e l’espressione di geni infiammatori. Una segnalazione *Esr2* deregolata è stata collegata, in modelli murini, ad alterazioni della fertilità, cambiamenti neurocomportamentali e a fisiopatologie ormone-responsivi rilevanti per disturbi metabolici e infiammatori.

Estrogen Receptor beta Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Esr2 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Esr2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Esr2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Esr2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.