ESE-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403728-ACT

ELF3 codifica a ESE-1, um fator de transcrição da família ETS com expressão restrita a epitélios, que regula a expressão gênica específica de linhagem e programas de diferenciação em tecidos de barreira. A ESE-1 integra sinais de vias inflamatórias e responsivas ao estresse para modular redes transcricionais que controlam a polaridade celular, a organização das junções e a proliferação, com relatos de crosstalk com circuitos regulatórios associados a MAPK/ERK e NF-κB. A atividade desregulada de ELF3 tem sido associada a alterações da homeostase epitelial e a mudanças em estados transcricionais ligados a tumores, tornando-o relevante para estudos de reprogramação oncogênica, fenótipos relacionados à invasão e interações epitélio–imunidade. Como regulador de ligação ao DNA, a ESE-1 oferece um ponto de intervenção acessível para dissecar a lógica de promotores/realçadores (enhancers) e saídas transcricionais dependentes do contexto em modelos de células humanas.

ESE-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ELF3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ESE-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ELF3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ELF3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ESE-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ELF3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ESE-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ESE-1 em células tumorais com expressão de ELF3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.