ESAM Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-413872-ACT

A molécula de adesão seletiva de células endoteliais (ESAM) é uma proteína de membrana da superfamília das imunoglobulinas, enriquecida nas junções apertadas endoteliais, onde sustenta a adesão célula–célula, a integridade da barreira vascular e a migração transendotelial de leucócitos. A ESAM participa da organização das junções e da regulação do citoesqueleto em conjunto com outros complexos de adesão endotelial, influenciando a remodelação angiogênica e o tráfego inflamatório. Alterações na expressão de ESAM têm sido associadas à disfunção vascular, à angiogênese associada a tumores e a contextos de doenças inflamatórias em que a permeabilidade endotelial e a infiltração de células imunes estão desreguladas. Como marcador de junção e regulador funcional, a ESAM é comumente estudada na diferenciação endotelial, em ensaios de permeabilidade vascular e em modelos de inflamação impulsionados pelo microambiente.

ESAM O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ESAM sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ESAM O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ESAM em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ESAM, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ESAM. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ESAM nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ESAM no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ESAM em células tumorais com expressão de ESAM silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.