Plásmido Doble Nickase (m) ERp57: sc-420698-NIC

El gen murino **Pdia3** codifica **ERp57 (PDIA3)**, una isomerasa de disulfuro de proteínas del retículo endoplásmico que coopera con **calnexina** y **calreticulina** para catalizar el plegamiento oxidativo y el control de calidad de glicoproteínas nacientes. La actividad de ERp57 favorece la proteostasis del RE, la formación de puentes disulfuro y la señalización vinculada al estrés del RE y a la respuesta a proteínas mal plegadas (UPR), influyendo en la presentación de antígenos mediante la carga de péptidos en el **MHC de clase I**. La desregulación de la función de PDIA3/ERp57 se ha asociado con alteraciones del equilibrio redox, respuestas al estrés proteotóxico y vías implicadas en la neurodegeneración, la disfunción metabólica y la biología tumoral. Como oxidorreductasa multifuncional, ERp57 también se estudia por sus posibles funciones en la homeostasis del calcio, la señalización relacionada con la adhesión celular y programas transcripcionales de adaptación al estrés.

ERp57 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Pdia3 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Pdia3. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Pdia3. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Pdia3 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.