Erg Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-420226-ACT

O Erg de camundongo codifica um fator de transcrição da família ETS que se liga a motivos centrais GGAA/T para regular programas gênicos que controlam a especificação endotelial, a estabilidade vascular e a manutenção de células-tronco e progenitoras hematopoéticas. Erg integra sinais de vias angiogênicas e responsivas a citocinas, incluindo redes transcricionais endoteliais impulsionadas por VEGF e a regulação do output transcricional ligada a MAPK/PI3K. A atividade desregulada de ERG é amplamente estudada em circuitos transcricionais oncogênicos, particularmente em neoplasias hematológicas e em contextos de fusões dirigidas por ETS, nos quais a expressão alterada de genes-alvo impacta a proliferação, a diferenciação e a identidade celular. Em sistemas murinos, Erg é frequentemente usado para modelar comprometimento de linhagem, biologia vascular e dependência de fatores de transcrição no desenvolvimento normal e em estados celulares relevantes para doenças.

Erg O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Erg sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Erg O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Erg em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Erg, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Erg. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Erg nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Erg no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Erg em células tumorais com expressão de Erg silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.