eRF3a CRISPR/Cas9 케이오 플라스미드 (h): sc-404748

개요

GSPT1은 진핵 번역 방출 인자 3a(eRF3a)를 암호화하며, eRF3a는 리보솜에 결합하는 GTPase로서 eRF1과 짝을 이루어 종결 코돈 인식 후 번역 종결을 유도하고 리보솜 재활용을 촉진합니다. eRF3a는 조절된 GTP 가수분해와 poly(A)-결합 단백질 및 기타 번역 인자들과의 상호작용을 통해 mRNA 감시, 단백질 항상성(proteostasis), 그리고 단백질 합성의 정확성(fidelity)을 조율하는 데 기여합니다. 번역 종결과 RNA 품질 관리 경로에 대한 조절 이상은 비정상적인 세포 성장 프로그램 및 스트레스 반응과 연관되어 왔으며, 따라서 GSPT1은 번역 조절이 신호전달 및 항상성 네트워크와 어떻게 맞물리는지를 연구하는 데 유용한 중심 노드가 됩니다. 생의학 연구에서 eRF3a를 교란하면 종결 코돈 readthrough, nonsense-mediated decay(NMD)와의 결합 메커니즘, 그리고 단백질체 유지가 손상될 때 드러나는 취약성을 규명하는 데 활용할 수 있습니다.

eRF3a CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (h)는 human 세포주에서 GSPT1 유전자의 표적 파괴를 위해 설계된 플라스미드 풀입니다. 각 플라스미드는 GSPT1 유전자 내의 서로 다른 부위를 표적으로 하는 고유한 단일 가이드 RNA(sgRNA)와 Streptococcus pyogenes Cas9 뉴클레아제를 함께 발현합니다. 또한 이 플라스미드들은 GFP를 암호화하여, 형광 현미경이나 유세포 분석기를 통해 성공적으로 형질전환된 세포를 형광으로 식별하고 농축할 수 있게 합니다.

다중 가이드 설계는 Cas9에 의한 이중 가닥 절단 형성 후 GSPT1의 개방 독서 틀(ORF)을 파괴하는 삽입 또는 결실(indel)이 발생할 가능성을 높입니다. CRISPR/Cas9 시스템에 의해 유발된 DNA 절단은 내인성 비동종 말단 결합(NHEJ) 경로를 통해 복구되며, 이는 종종 eRF3a 단백질 발현을 소멸시키는 프레임 시프트 돌연변이를 초래합니다.

이 CRISPR 녹아웃 시스템은 eRF3a 신호 전달 연구, 기능 유전체학 연구, 암 생물학 연구 및 인간 세포주에서의 치료 반응 평가를 위한 GSPT1 결핍 세포 모델을 효율적으로 생성할 수 있게 합니다.

주요 특징

• eRF3a 기능에 중요한 GSPT1 엑손을 표적하는 sgRNA
  전달을 단순화하기 위해 단일 플라스미드에서 SpCas9 및 sgRNA의 공동 발현
  형질전환된 세포 식별을 위한 GFP 리포터
  녹아웃 효율 향상을 위해 여러 GSPT1 게놈 부위를 표적하는 플라스미드 풀
  형질전환을 통한 전달과 호환

설계 변형

CRISPRs +/- HDR

• eRF3a CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (h) 및 eRF3a CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (h2)에 의해 암호화되는 gRNA는 GSPT1 유전자좌 내의 서로 다른 부위를 표적화합니다. 표적화 설계 중 하나 또는 둘 다 이용 가능할 수 있습니다. 구입 가능 여부는 관련 제품을 참조하십시오.
  eRF3a HDR 플라스미드 (h) 및 eRF3a HDR 플라스미드 (h2)에 의해 암호화되는
  HDR 기증자 컨스트럭트는 푸로마이신 내성 카세트와 RFP 리포터를 포함하며, 이는 CRISPR/Cas9 KO 설계에 해당하는 정의된 GSPT1 표적 부위에서의 상동성 유도 복구를 지원하기 위해 GSPT1 상동성 암으로 둘러싸여 있습니다. HDR 기증자의 재고 여부는 달라질 수 있습니다. 재고 여부는 관련 제품을 참조하십시오.

연구용으로만 사용하세요. 진단 또는 치료용이 아닙니다.