Plasmide Double Nickase (h) ErbB3/HER3: sc-400146-NIC

ERBB3 code ErbB3/HER3, un membre de la famille des récepteurs tyrosine kinases ERBB dont le domaine kinase intrinsèque est déficient et qui fonctionne principalement par hétérodimérisation, notamment avec ERBB2/HER2. L'activation dépendante des ligands par les neurégulines favorise la formation de complexes récepteurs et des événements de phosphorylation qui propagent les voies PI3K–AKT et MAPK, coordonnant la prolifération, la survie, la différenciation et les décisions de destin des cellules épithéliales. ERBB3 est fréquemment impliqué dans des réseaux de signalisation oncogéniques, où une expression altérée ou un recâblage des voies peut soutenir des changements de dépendance aux facteurs de croissance et une signalisation adaptative. Son rôle central dans le dialogue croisé entre récepteurs en fait une cible couramment utilisée pour étudier la robustesse de la signalisation, la régulation par rétroaction et les mécanismes de résistance aux médicaments au niveau des voies.

ErbB3/HER3 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ERBB3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ERBB3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ERBB3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ERBB3.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.